線粒體外膜轉(zhuǎn)位因子Tom40在大腸桿菌中的表達和重新折疊的研究.pdf

1、線粒體內(nèi)含有1000-1500種蛋白質(zhì)，除參與氧化磷酸化的13種多肽外，98％以上的蛋白質(zhì)都是由細胞核基因編碼，經(jīng)轉(zhuǎn)錄、翻譯并在細胞質(zhì)核糖體中以前體形式合成后，再轉(zhuǎn)運進入線粒體的。研究表明，在線粒體內(nèi)膜和外膜上存在一系列涉及蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運的蛋白質(zhì)復合物，稱為轉(zhuǎn)位因子(translocatior，又稱為translocase)，主要包括外膜的TOM復合體和SAM復合體，內(nèi)膜的TIM23復合體、TIM22復合體和OXAI復合體，它們在結構上都由

2、受體和供蛋白質(zhì)通過的孔道兩部分構成。其中TOM轉(zhuǎn)運復合體是線粒體蛋白進入線粒體的第一道屏障，當前體蛋白由細胞質(zhì)基質(zhì)移向線粒體表面時，TOM復合體就會對其進行識別及轉(zhuǎn)運，根據(jù)前體蛋白的識別情況，前體蛋白分為三種類型：(1)無前序列，Tom70依賴的前體蛋白；(2)含前序列，Tom70依賴的前體蛋白；(3)含前序列，非Tom70依賴的前體蛋白。
　　 Tom40蛋白是TOM轉(zhuǎn)運復合體的核心組分，它與受體蛋白Tom22及小Tom蛋白，

3、Tom5、Tom6、Tom7穩(wěn)定結合，共同形成400kDa的整體輸入孔道——GIP復合體(General Import Pore)。對線粒體蛋白通過TOM復合體的轉(zhuǎn)運起著至關重要的作用。盡管近年來人們對TOM復合體及其亞基轉(zhuǎn)運蛋白的功能進行了大量的研究，然而由于其核心亞基Tom40的三維空間結構尚未解析出來，其轉(zhuǎn)運蛋白的機理尚不清楚。在本研究中，我們嘗試用大腸桿菌表達系統(tǒng)大量的表達大鼠Tom40蛋白(rTom40)，發(fā)現(xiàn)該蛋白以包涵體的