膽固醇對人內(nèi)皮細胞DNA的損傷及絞股藍總苷的保護作用.pdf

1、目的:研究膽固醇對人內(nèi)皮細胞DNA的損傷及絞股藍總苷的保護作用。
　　 方法:1.培養(yǎng)并鑒定人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(CRL-1730)。2.三種方法檢測γH2AX:用12.5mg/L,25mg/L,50mg/L膽固醇作用于人臍靜脈內(nèi)皮細胞12小時,免疫熒光法觀察細胞中γH2AX形成的焦點;Westernblot及流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)γH2AX表達量變化。3.先用NAC(10mM)或1μg/mL,10μg/mL,100μg/mL,絞股

2、藍總苷預(yù)作用細胞1小時,再用50mg/L膽固醇作用細胞12小時,免疫熒光法觀察細胞中γH2AX形成的焦點,Westernblot檢測細胞內(nèi)7H2AX表達量變化:流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)活性氧的變化。
　　 結(jié)果:1.成功培養(yǎng)了人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞株(CRL-1730),經(jīng)免疫熒光鑒定為內(nèi)皮細胞。2.不同濃度的膽固醇作用人臍靜脈內(nèi)皮細胞12小時后,免疫熒光結(jié)果顯示不同濃度的膽固醇均可誘導(dǎo)細胞內(nèi)γH2AX形成焦點,隨著膽固醇濃度的增加,

3、γH2AX形成焦點的熒光強度也逐漸增強;Westernblot結(jié)果及流式細胞術(shù)結(jié)果表明,膽固醇作用后細胞內(nèi)γH2AX表達量隨膽固醇濃度增大而增強。3.用NAC或絞股藍總苷預(yù)作用細胞后,免疫熒光結(jié)果顯示隨著絞股藍總苷的濃度的增大,細胞內(nèi)的γH2AX形成的焦點熒光強度逐漸減弱,與50mg/L膽固醇作用組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義:Westernblot結(jié)果結(jié)果表明,細胞內(nèi)γH2AX表達量隨絞股藍總苷濃度增大而減弱,與50mg/L膽固醇作用組比