菊花CVB、TAV和CChMVd病毒的RT-PCR檢測及匍匐小菊葉盤再生體系的建立.pdf

1、危害菊花的病毒種類很多，已報道的有20余種，我國初步鑒定出7種。對于我國來說，相當一部分的菊花病毒病都屬于檢疫性病害。因此菊花病毒檢測方法的研究，對我國菊花產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要意義。匍匐小菊是通過抗逆性強的野生小菊與分枝性強且生長速度快的野生小菊雜交而育成的新種，該種植株低矮，生長速度快，是極好綠化材料。為了能夠使用轉(zhuǎn)基因技術(shù)對匍匐小菊進行改良，建立其組織培養(yǎng)再生系統(tǒng)是必要的。本研究以四個菊花品種為材料，研究了PT-PCR檢測CVB、TA

2、V、CChMVd的技術(shù)；以匍匐小菊為材料，建立匍匐小菊的葉盤再生體系。取得以下研究結(jié)果： 1.利用CVB、TAV、CChMVd的已知基因序列設(shè)計引物，對這三種病毒進行了RT-PCR檢測，建立了RT-PCR檢測技術(shù)體系，并克隆了特異擴增產(chǎn)物，測序結(jié)果與已報道的基因序列進行核苷酸同源性分析。RT-PCR得到的CVB基因的部分片段，長633bp，該序列與已發(fā)表的序列同源性在82％左右。RT-PCR得到的TAV基因的部分片段，長842b

3、p，該序列與已發(fā)表的序列同源性在98％左右。CChMVd是一種類病毒，通過RT-PCR得到的片段，長217bp，該序列與已發(fā)表的序列同源性在98％以上。 2.以CChMVd為材料測試RT-PCR的靈敏度，結(jié)果表明，PCR體系中含有fg級病毒RNA，反轉(zhuǎn)錄后，可以檢測出來。 3.建立了菊花B病毒(CVB)和番茄不孕病毒(TAV)兩重RT-PCR檢測體系，檢測效果與普通RT-PCR相同。 4.利用得到的TAV CP的