鹽酸青藤堿誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的機(jī)制及在抗炎中的作用.pdf

1、研究背景:青藤堿(sinomenine,SIN)作為一種生物堿單體,是從防己科植物青風(fēng)藤中提取的。其藥理作用包括抗炎癥及免疫抑制等,多以其鹽酸鹽形式用藥。青藤堿現(xiàn)在已經(jīng)廣泛用于治療多種炎性或自身免疫性疾病,如類風(fēng)關(guān)和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等,臨床療效較好,但有待深入研究其作用機(jī)制。而高遷移率族蛋白B1(highmobilitygroupbox1,HMGB1)與多種自身免疫性疾病緊密相關(guān)。HMGB1作為一種可以級(jí)聯(lián)放大炎癥效應(yīng)的關(guān)鍵細(xì)胞因子,已經(jīng)

2、成為進(jìn)行抗炎癥治療和免疫抑制非常具有吸引力的新靶標(biāo)。自噬是一種清除異常積聚蛋白的過(guò)程,主要包括對(duì)自噬底物的識(shí)別,再形成自噬囊泡,最后與溶酶體融合。目前已有大量研究表明,自噬與各種炎癥因子的加工過(guò)程關(guān)系密切。但是,關(guān)于鹽酸青藤堿在治療炎癥過(guò)程中的具體作用機(jī)制是否與自噬、炎癥因子HMGB1之間存在相互調(diào)節(jié)的關(guān)系尚無(wú)報(bào)道。弄清該問(wèn)題,可以闡明三者在炎癥中的相互作用以及機(jī)制,為治療多種炎性、自身免疫性疾病提供新的思路及策略。
　　研究目的

3、:明確治療炎癥過(guò)程中鹽酸青藤堿與自噬、炎癥因子HMGB1的聯(lián)系和對(duì)炎癥的影響。
　　研究方法:選取人內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926為細(xì)胞模型。經(jīng)鹽酸青藤堿分別在基礎(chǔ)水平及LPS誘導(dǎo)下處理12h或1h后,利用westernblot法檢測(cè)自噬標(biāo)志性蛋白LC3II和pERK1/2的表達(dá)變化;利用熒光顯微鏡觀察GFP-LC3標(biāo)記或吖啶橙染色的自噬體的細(xì)胞內(nèi)分布情況;另外加入ERK1/2通路抑制劑U0126觀察LC3II蛋白量和自噬體數(shù)量的變化。

4、利用RT-PCR和westernblot法檢測(cè)HMGB1的表達(dá);經(jīng)自噬抑制劑CQ作用,采用RT-PCR和westernblot法檢測(cè)HMGB1表達(dá)的變化。
　　研究結(jié)果:
　　(1)鹽酸青藤堿在基礎(chǔ)水平及LPS誘導(dǎo)水平,促進(jìn)人內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926中的LC3II的表達(dá)并增加自噬體的形成,使用ERK1/2通路抑制劑U0126可抑制該作用;
　　(2)鹽酸青藤堿在基礎(chǔ)水平及LPS誘導(dǎo)水平,下調(diào)人內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926中