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1、目的:初步研究OSW-1對(duì)SK-Hep1肝癌細(xì)胞線粒體功能的作用。
方法:①通過(guò)溴化乙錠建立線粒體 DNA缺失的肝癌細(xì)胞模型ρ0SK-Hep1,并通過(guò)PCR及營(yíng)養(yǎng)缺陷型方法進(jìn)行鑒定。②通過(guò)WST-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖并繪制SK-Hep1細(xì)胞與ρ0SK-Hep1細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線和在OSW-1作用下的抑制率。③多功能酶標(biāo)儀觀察 OSW-1作用下SK-Hep1、ρ0SK-Hep1細(xì)胞內(nèi)ATP及ROS產(chǎn)生情況。
結(jié)果:①ρ0SK
2、-Hep-1細(xì)胞在不含丙酮酸和尿嘧啶核苷的培養(yǎng)基中無(wú)法生存。而在含丙酮酸和尿嘧啶核苷的培養(yǎng)基中可以正常生長(zhǎng)并增殖。聚合酶鏈反應(yīng)顯示,SK-Hep1細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞色素氧化酶I、II和 G3PDH,而ρ0SK-Hep1細(xì)胞只表達(dá) G3PDH。②OSW-1作用于 SK-Hep1、ρ0SK-Hep1細(xì)胞后,SK-Hep1細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯受抑制(p<0.01),而對(duì)ρ0SK-Hep1細(xì)胞作用不明顯(p>0.05)。SK-Hep1細(xì)胞 ATP生成減少(
3、p<0.01),而對(duì)ρ0SK-Hep1細(xì)胞作用不明顯(p>0.05)。③OSW-1與多柔比星作用于SK-Hep1、ρ0SK-Hep1細(xì)胞后,SK-Hep1細(xì)胞隨著兩種藥物濃度的增高而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ROS隨之增高,但OSW-1較之于多柔比星的作用更為明顯,而OSW-1對(duì)ρ0SK-Hep1細(xì)胞的作用不明顯。
結(jié)論:①ρ0SK-Hep1細(xì)胞較母本細(xì)胞株 SK-Hep1細(xì)胞增長(zhǎng)緩慢,ATP生成減少、ROS生成增加。
?、贠SW-1
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