不可切除的胰腺癌患者介入治療后回顧性生存分析及吉西他濱耐藥相關(guān)microRNAs的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分不可切除的胰腺癌患者介入治療后回顧性生存分析
　　目的:通過對(duì)不可切除的胰腺癌患者介入治療后回顧性生存分析，評(píng)估影響胰腺癌介入治療后生存期的因素，探索有效的胰腺癌介入治療方案。
　　資料與方法:收集并回顧性分析159例胰腺癌患者的介入治療病史資料，并對(duì)影響胰腺癌患者介入治療后生存期的因素和治療模式進(jìn)行單因素及COX模型多因素分析。
　　結(jié)果:159例患者總隨訪中位生存期(MST)為10.32個(gè)月，總的介入治療后

2、MST為8.11個(gè)月?？?年累積生存率27.0％，2年累積生存率11.0％，3年累積生存率2.0％，5年累積生存率為0.6％。根據(jù)臨床反應(yīng)率(CBR)評(píng)估判定介入治療后能緩解癥狀的介入次數(shù)平均值為2.6次。單因素分析顯示影響胰腺癌介入治療后MST的主要因素有:初次介入治療前CA199值，第一次介入術(shù)后CA199的變化，初次介入前KPS評(píng)分，初次介入前癥狀，介入治療前肝功能分級(jí)，介入治療前有無手術(shù)史，介入治療次數(shù)。而年齡，性別，初次介入前

3、血紅蛋白值，腫瘤分期（Ⅱ-Ⅲ期與Ⅳ期），初次介入時(shí)CEA的值，初次介入前后CEA的變化，治療藥物（是否含吉西他濱+奧沙利鉑），治療方案（TAI和TACE），術(shù)前是否存在糖尿病，腫瘤部位（是否為胰頭部），病理是否為導(dǎo)管腺癌，均顯示差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多因素分析顯示對(duì)介入治療后生存期有影響的獨(dú)立因素是:開始介入治療時(shí)肝功能分級(jí)，初抬時(shí)KPS評(píng)分，有無原發(fā)灶手術(shù)切除史。
　　結(jié)論:介入治療包括TAI和TACE對(duì)于胰腺癌患者在改善患者癥

4、狀和延長中位生存期方面有一定的治療作用，介入治療后生存期與患者的體力狀態(tài)，存在癥狀和有無早期手術(shù)治療有關(guān)。早診早治和降低胰腺癌對(duì)化療的耐藥性研究成為我們的研究方向。
　　第二部分21G細(xì)針穿刺抽吸及空芯切割活檢法診斷效率和安全性回顧性研究
　　目的:應(yīng)用21G細(xì)針穿刺抽吸及空芯切割(FNAC)活檢方法，與用18G空芯穿刺活檢槍相比在肝腫瘤穿刺活檢中的安全性和診斷效率，并探討21G FNAC在胰腺腫瘤穿刺活檢中的安全性和診斷效

5、率。
　　資料與方法:1.94例CT或MRI及腫瘤指標(biāo)臨床診斷為肝惡性腫瘤，無法行手術(shù)切除擬行經(jīng)動(dòng)脈化療栓塞治療(TACE)，欲明確其病理類型的患者，行肝穿刺活檢以明確病理類型。隨機(jī)分為18G TCN組和21G FNAC組.均在B超引導(dǎo)下穿刺進(jìn)入腫瘤組織內(nèi)，對(duì)照組18G TCN組直接用18G True-cut活檢槍取材;21GFNAC組用21G穿刺針穿刺入腫瘤組織內(nèi)后，拔出針芯，接注射器，用空心針于腫瘤組織內(nèi)反復(fù)切割抽吸數(shù)次，將切

6、割抽吸所得組織和穿刺液送病理組織檢查和細(xì)胞學(xué)檢查。穿刺結(jié)束后，行腫瘤動(dòng)脈血管造影，明確有無穿刺道出血表現(xiàn)。并根據(jù)腫瘤病情給予TACE治療。統(tǒng)計(jì)比較分析2組穿刺方法的總陽性率及安全性有無差異。2.用21G FNAC法對(duì)18例胰腺腫瘤穿刺活檢，分析其并發(fā)癥發(fā)生情況和總陽性率。
　　結(jié)果:1.2組肝穿刺患者均完成穿刺活檢，結(jié)合穿刺組織病理和細(xì)胞學(xué)檢查得出總陽性率，其中18G TCN組總陽性率為89.1％(41/46)，造影顯示穿刺道肝包

7、膜下出血率6.5％(3/46)，與穿刺有關(guān)的疼痛率78.3％(36/46)，穿刺后小動(dòng)靜脈瘺形成8.7％(4/46)。21G FNAC組總陽性率81.3％(39/48)，2組總陽性率經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值＞0.05）。穿刺后造影無包膜下出血，無動(dòng)靜脈瘺形成，與穿刺有關(guān)的疼痛率為22.9％(11/48)，2組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2組所有與穿刺有關(guān)的疼痛患者均為輕微疼痛(VAS＜3)在術(shù)后第2-3d好轉(zhuǎn)，無需使用鎮(zhèn)痛劑。無一

8、例患者出現(xiàn)氣胸、胸腔積液、腹膜炎。隨訪3個(gè)月后兩組均無穿刺道種植。2.18例胰腺腫瘤患者用21G FNAC法均穿刺成功，TPR為61.1％(11/18)，穿刺有關(guān)疼痛率為27％(5/18)，胰腺炎發(fā)生率0.56％(1/18)，無其它并發(fā)癥發(fā)生。
　　結(jié)論:21G FNAC與18G TCN都能在肝穿刺中獲得足夠用于病理診斷的組織樣本，21G FNAC與18G TCN相比在TPR方面差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是在安全性方面優(yōu)于18G T

9、CN。21G FNAC的安全性和診斷率可適用于胰腺腫瘤穿刺活檢。
　　第三部分吉西他濱耐藥相關(guān)microRNAs的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:通過體外模擬胰腺癌細(xì)胞接觸化療藥物，形成耐藥的過程，尋找與胰腺癌耐藥形成過程中的相關(guān)microRNAs(miRNAs)，并探索興趣miRNA對(duì)胰腺癌耐藥形成相關(guān)的基因表達(dá)的調(diào)節(jié)情況，以及對(duì)臨床用藥的指導(dǎo)意義。
　　材料與方法:采用BxPC-3胰腺癌細(xì)胞株建立吉西他濱耐藥株，用濃度遞增和短

10、時(shí)作用法誘導(dǎo)，取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞加吉西他濱作用48小時(shí)，從低濃度2ng/ml遞增至30ng/ml，作用后，換液清洗敏感死亡細(xì)胞，再加藥篩選，如此反復(fù)誘導(dǎo)，得到耐藥株細(xì)胞。取BxPC-3胰腺癌細(xì)胞與吉西他濱耐藥細(xì)胞株進(jìn)行miRNA芯片檢測(cè)，對(duì)比找出下調(diào)的miRNAs，并分析其主要調(diào)控的基因。用Real-time PCR和Western免疫印跡(Western Bolt)檢測(cè)這些基因在耐藥形成中的表達(dá)情況，驗(yàn)證芯片結(jié)果。
　　結(jié)果:成

11、功建立了吉西他濱耐藥的BxPC-3胰腺癌細(xì)胞系。通過芯片檢測(cè)和分析，找到和親本細(xì)胞相比，耐藥株細(xì)胞表達(dá)顯著上調(diào)的miRNAs有11條，顯著下調(diào)的miRNAs有23條。對(duì)結(jié)果進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)調(diào)控分析表明:has-mir-20a在調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的度為最高，其調(diào)控的靶基因中ABCG2的度為最高。Real-time PCR的結(jié)果表明，和親本細(xì)胞相比，耐藥株細(xì)胞has-mir-20a表達(dá)下調(diào)，驗(yàn)證了芯片結(jié)果。而Western bolt檢測(cè)出ABCG2的表達(dá)顯