槲皮素干預(yù)阿霉素誘導(dǎo)COX-2表達(dá)介導(dǎo)的HL-60細(xì)胞多藥耐藥的研究.pdf

1、目的：白血病是威脅人類健康的主要惡性腫瘤之一，目前化學(xué)藥物治療仍是其主要的治療手段，但白血病存在明顯的獲得性或誘導(dǎo)耐藥，是導(dǎo)致化療失敗和預(yù)后較差的主要原因之一?，F(xiàn)有研究己表明環(huán)氧化酶-2(COX-2)與血液系統(tǒng)腫瘤有密切的關(guān)系，COX-2過表達(dá)提示血液系統(tǒng)腫瘤預(yù)后不良。目前COX-2與白血病的多藥耐藥現(xiàn)象的產(chǎn)生是否存在一定的關(guān)系還不十分清楚。本實驗旨在研究化療藥物處理后的白血病細(xì)胞的獲得性耐藥現(xiàn)象，探討COX-2在白血病化療所致多藥耐藥

2、中的作用，以及槲皮素干預(yù)白血病細(xì)胞耐藥形成的機制，為解決白血病細(xì)胞的耐藥問題提供實驗基礎(chǔ)及理論依據(jù)。 方法：1．MTT法檢測不同濃度阿霉素、槲皮素、塞來考昔單獨用藥，阿霉素與槲皮素、阿霉素與塞來考昔聯(lián)合用藥對HL-60細(xì)胞的生長抑制率。2．倒置熒光顯微鏡及瑞氏染色后光學(xué)顯微鏡下觀察HL-60細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。3．逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測阿霉素、槲皮素和塞來考昔作用后HL-60細(xì)胞COX-2基因及MDR1基因的表達(dá)

3、情況。4．酶聯(lián)免疫吸附試驗(Elisa)檢測阿霉素、槲皮素和塞來考昔作用后HL-60細(xì)胞上清液中前列腺素E2(PGE2)含量的變化。 結(jié)果：1．MTT實驗檢測結(jié)果顯示：阿霉素、槲皮素單獨用藥對HL-60細(xì)胞的生長均有明顯抑制作用，且呈明顯的濃度依賴關(guān)系，其半數(shù)有效抑制濃度(IC50)分別為(0.1518±0.0352)μg/ml，(31.8806±5.7420)μmol/l。塞來考昔對HL-60細(xì)胞的生長抑制作用不明顯。槲皮素(

4、10μmol/l)與阿霉素聯(lián)合用藥對HL-60細(xì)胞的IC50為(0.0331±0.0069)μg/ml，生長抑制作用較阿霉素單獨用藥增加了4.57倍(P<0.05)。塞來考昔(20μmol/l)與阿霉素聯(lián)合用藥對HL-60細(xì)胞的IC50為(0.0495±0.0071)μg/ml，生長抑制作用較阿霉素單獨用藥時增加了3.07倍(P<0.05)。2.倒置熒光顯微鏡及光學(xué)顯微鏡下觀察可見實驗中阿霉素單獨用藥組HL-60細(xì)胞與對照組HL-60細(xì)

5、胞相比體積明顯增大，阿霉素與槲皮素聯(lián)合用藥組HL-60細(xì)胞體積與對照組HL-60細(xì)胞相比體積增大，無阿霉素單獨用藥組體積增大明顯。3.RT-PCR實驗檢測結(jié)果表明：終濃度0.02μg/ml的阿霉素作用于HL-60細(xì)胞72h后COX-2 mRNA和MDR1 mRNA表達(dá)水平分別較對照組升高3.68倍和3.29倍(P<0.05)。槲皮素與0.02μg/ml阿霉素聯(lián)合用藥后COX-2mRNA和MDR1 mRNA表達(dá)水平分別較阿霉素單獨用藥組有

6、所下降(P<0.05)。100μmol/l、50μmol/l塞來考昔與阿霉素聯(lián)合用藥后COX-2 mRNA和MDR1 mRNA表達(dá)水平與單獨應(yīng)用阿霉素時比較也有所下降(P<0.05)。20μmol/l塞來考昔與阿霉素聯(lián)合用藥后COX-2mRNA和MDR1 mRNA表達(dá)水平與單獨應(yīng)用阿霉素時比較未見明顯變化(P>0.05)。相關(guān)性分析顯示COX-2 mRNA和MDR1 mRNA表達(dá)水平有顯著相關(guān)性(R=0.965，P<0.01)。4.0.

7、2μg/ml阿霉素作用48h后所提取的上清液中PGE2濃度較對照組明顯升高(P<0.05)。 20μmol/l、10μmol/l槲皮素分別與阿霉素聯(lián)合用藥后所提取的HL-60細(xì)胞上清液中PGE2濃度均較單獨使用阿霉素明顯降低(P<0.05)。50μmol/l、20μmol/l塞來考昔分別與阿霉素聯(lián)合用藥后所提取的HL-60細(xì)胞上清液中PGE2濃度均較單獨使用阿霉素明顯降低(P＜0.05)。 結(jié)論：本論文初步探明了：1．黃

8、酮類化合物槲皮素能明顯抑制HL-60細(xì)胞的生長，槲皮素與阿霉素聯(lián)合用藥可增強HL-60細(xì)胞對阿霉素的化療敏感性，從而干預(yù)白血病細(xì)胞多藥耐藥的發(fā)生，槲皮素可能成為蒽環(huán)類化療藥物治療白血病的有效且低毒的化療增敏劑。2．COX-2與MDR1的共表達(dá)有相關(guān)性，在白血病細(xì)胞對阿霉素誘導(dǎo)的多藥耐藥形成機制中COX-2起了主導(dǎo)作用。COX-2基因參與了白血病細(xì)胞耐藥性的形成。干預(yù)COX-2基因的表達(dá)可干預(yù)白血病細(xì)胞多藥耐藥性的形成。3．槲皮素聯(lián)合阿霉