PPARγ和CTGF對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：觀察過(guò)氧化物酶體增生物激活受體γ(PPARγ)激動(dòng)劑羅格列酮(RSG)和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子單克隆抗體(CTGFmAb)對(duì)人胃癌細(xì)胞系BGC823生長(zhǎng)、侵襲和遷移的影響，初步探討PPARγ、CTGF在胃癌形成機(jī)制中的作用以及它們之間的聯(lián)系，以期為臨床治療提供新的思路。 方法：體外培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞系BGC823，分別經(jīng)不同濃度RSG或CTGFmAb作用，觀察不同時(shí)間處理前后BGC823細(xì)胞的形態(tài)改變；MTT法測(cè)定腫瘤細(xì)胞活力；Bo

2、yden小室法觀察癌細(xì)胞侵襲、遷移能力的改變；RT-PCR檢測(cè)BGC823細(xì)胞CTGFmRNA、COX-2mRNA和MMP-2mRNA表達(dá)水平；應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)PPARγ、CTGF、COX-2和MMP-2在BGC823胃癌細(xì)胞中的表達(dá)。 結(jié)果： (1)RSG處理BGC823細(xì)胞，濃度5μmol/L的RSG對(duì)BGC823細(xì)胞的增殖抑制作用不明顯，濃度25μmol/L以上的RSG明顯抑制BGC823細(xì)胞的生長(zhǎng)，與對(duì)照組比較差

3、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P<0.01)。大于50μmol/L時(shí)無(wú)明顯量效關(guān)系(P＞0.05)。 (2) 不同濃度CTGFmAb處理BGC823細(xì)胞，10mg/L～100mg/L范圍的CTGFmAb可以明顯抑制BGC823細(xì)胞的生長(zhǎng)(P＜0.05或P<0.01)，而0.1mg/L及1mg/LCTGFmAb對(duì)BGC823細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用不明顯。 (3)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察顯示RSG作用于BGC-823細(xì)胞后，細(xì)胞增殖減慢，

4、體積變小，貼壁細(xì)胞逐漸減少，核染色質(zhì)濃縮、聚積于核膜周邊，核深染，培養(yǎng)液出現(xiàn)懸浮細(xì)胞。CTGFmAb處理組的細(xì)胞胞核變小，核仁明顯，細(xì)胞逐漸變圓、皺縮，核染色質(zhì)固縮積聚至核膜周邊，核深染。而對(duì)照組BGC-823細(xì)胞剛貼壁時(shí)通常為圓形，隨后細(xì)胞形態(tài)伸展，呈多角形，呈上皮樣貼壁生長(zhǎng)，生長(zhǎng)旺盛，細(xì)胞輪廓清楚，核大，染色深，培養(yǎng)液中僅見(jiàn)少許漂浮的細(xì)胞。 (4)50μmol/L RSG處理組BGC823細(xì)胞侵襲穿膜數(shù)為74.73±7.35

5、，遷移穿膜數(shù)為61.23±7.28，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (5)10mg/L CTGFmAb處理組BGC823細(xì)胞其侵襲穿膜細(xì)胞數(shù)為79.94±6.08，遷移穿膜細(xì)胞數(shù)為66.74±5.12，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (6)PRARγ,蛋白在BGC823細(xì)胞中有表達(dá)，RSG處理組PRARγ染色陽(yáng)性強(qiáng)度強(qiáng)于對(duì)照組PRARγ,染色(P＜0.05)。 (7)CTGF蛋

6、白在BGC823細(xì)胞中有表達(dá)，RSG處理組、CTGFmAb處理組CTGF染色陽(yáng)性強(qiáng)度均弱于對(duì)照組CTGF染色(P<0.01)。 (8)COX-2蛋白在BGC823細(xì)胞中有表達(dá)，RSG處理組、CTGFmAb處理組COX-2染色陽(yáng)性強(qiáng)度均弱于對(duì)照組COX-2染色(p＜0.01)。 (9)MMP-2蛋白在BGC823細(xì)胞中有表達(dá)，RSG處理組、CTGFmAb處理組MMP-2染色陽(yáng)性強(qiáng)度均弱于對(duì)照組MMP-2染色(P<0.01)

7、。 (10)50μmol/LRSG處理組BGC823細(xì)胞，其CTGFmRNA、COX-2 mRNA和MMP-2mRNA相對(duì)光密度值均顯著低于對(duì)照組相對(duì)光密度值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。 (11)10mg/LCTGFmAb處理組BGC823細(xì)胞，其COX-2mRNA和MMP-2mRNA相對(duì)光密度值均顯著低于對(duì)照組相對(duì)光密度值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。 結(jié)論 (1)PPARγ激動(dòng)劑R

8、SG能抑制BGC-823細(xì)胞增殖，并且在一定范圍內(nèi)呈劑量時(shí)間依賴性。RSG可明顯抑制細(xì)胞的侵襲和遷移。提示RSG的作用可能與激活PPARγ介導(dǎo)的信號(hào)途徑有關(guān)(2)CTGFmAb能夠抑制BGC-823細(xì)胞增殖，同時(shí)能夠降低BGC-823細(xì)胞的侵襲和遷移能力。提示CTGF可能促進(jìn)BGC-823細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。 (3)RSG、CTGFmAb均能誘導(dǎo)BGC-823細(xì)胞形態(tài)的改變。 (4)RSG、CTGFmAb分別下調(diào)BG